Москва, ул. Лобачевского, д. 20

Москва, ул. Усачева, д. 33, стр. 4

Исследование гоносом FISH-методом у преимплантационных эмбрионов

logo

Данная статья описывает исследование преимплантационных эмбрионов с помощью FISH-метода (fluorescent in situ hybridization) у супружеских пар, проходящих лечение бесплодия методом экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).

Суть исследования

Проводили определение пола у 360 эмбрионов, полученных у 42 супружеских пар в 60 циклах стимуляции суперовуляции в программе ЭКО. После биопсии и фиксации бластомеров пригодным к проведению диагностики оказалось 281 ядро, из них 217 (77,2%) не несли хромосомной патологии. 104 ядра содержали женский набор хромосом, 113 –мужской. В 64 ядрах (22,8%) были выявлены различные виды анеуплоидии гоносом. Дальнейшее развитие эмбрионов после проведения биопсии бластомера наблюдалось в 79%.

В 10 циклах стимуляции из 60 перенос не производился в связи с отсутствием эмбрионов нужного пола. Беременность наступила в 17 циклах (28% на цикл стимуляции и 34% на перенос эмбрионов). Из 13 клинически подтвержденных беременностей 4 прервались в 1-ом триместре, 1 –во 2-ом. 8 беременностей закончились рождением 10 (2 двойни) здоровых детей желаемого пола.

Из 64 ядер, содержащих хромосомную патологию, 19 (29,7%) имели моносомию X-хромосомы, 8 (12,5%) – моносомию Y-хромосомы. Трисомия была отмечена в 28 случаях (43,8%), полисомия в 8 (12,5%). Таким образом, полученные данные показали, что моносомия и трисомия являются наиболее частой хромосомной патологией гоносом.

Преимплантационная генетическая диагностика (ПД) возникла более 40 лет назад. Впервые R.Edwards и R.Gardner применили ее в 1967 г. для определения пола эмбрионов кролика. Уже тогда возникла идея использования данной технологии у человека для предотвращения передачи наследственных заболеваний от родителей детям. Однако такая возможность появилась только спустя 20 лет, когда в начале 90-х годов была разработана техника полимеразной цепной реакции (ПЦР), позволяющей выявлять мутации в единичных клетках [2]. Впервые ПЦР для проведения ПД в клинической практике применили A.Handyside и соавторы в 1990 г., выявив специфические последовательности для Y-хромосомы при определении пола эмбрионов у супружеских пар с X-сцепленными заболеваниями. С развитием науки от проведения ПЦР постепенно стали отказываться в пользу другого метода — флюоресцентной (нерадиоактивной) гибридизации in situ (FISH). Преимущество данного метода состояло в возможности одновременного определения как X-, так и Y-хромосомы. Кроме того, стало возможным определять не только пол эмбрионов, но и выявлять анеуплоидии половых хромосом (гоносом).

Молекулярно-цитогенетическое исследование FISH

На современном этапе развития медицины для определения пола преимплантационных эмбрионов используют молекулярно-цитогенетический метод FISH. Данный метод имеет ряд преимуществ перед другими способами молекулярной гибридизации: для генетического исследования методом FISH не требуется получения большого количества биологического материала, выделения ДНК из клеток, а также использования радиоизотопа P32. С помощью этого метода можно анализировать хромосомы на всех стадиях клеточного цикла, в том числе в интерфазе. Его принцип основан на специфической гибридизации определенных участков хромосом с флюоресцентно-меченными зондами. Метод позволяет определить структурные перестройки хромосом и выявить число их копий в интерфазных ядрах по флюоресценции зондов.

ПД молекулярно-цитогенетическим FISH-методом с определением пола, выявлением анеуплоидии и различных транслокаций в эмбрионах занимает большую часть от общего числа проводимой диагностики в рамках программ ВРТ. В большинстве клиник основными показаниями для определения пола эмбрионов являются: наличие рецессивного Х-сцепленного заболевания, наличие делеций в Y хромосоме, а также желание родителей.

Исследуя пол у эмбрионов, все авторы отметили у них высокий уровень анеуплоидии гоносом и мозаицизм. По данным разных авторов, клеточный мозаицизм у преимплантационных эмбрионов может наблюдаться до 50% случаев. Эти исследования подтвердили, что высокая доля хромосомных нарушений, выявленная у эмбрионов, не связана с недостатками методики FISH, а соответствует истинному кариотипу исследуемых клеток. Полученные результаты указывают на то, что при проведении преимплантационной генетической диагностики супружеским парам с целью определения пола эмбрионов необходимо одновременно исследовать их на наиболее распространенные трисомии.

Цель исследования

Определение пола эмбрионов и выявление патологии в комплексе гоносом.

Материалы и методы

В отделении вспомогательных технологий в лечении бесплодия НЦ АГиП им.академика В.И.Кулакова были проанализированы результаты проведения преимплантационной генетической диагностики (ПГД) с определением пола эмбрионов 42 супружеских пар по желанию пациентов. На момент исследования 2 пары были фертильны, остальные проходили лечение по программе ЭКО и ПЭ в связи с первичным или вторичным бесплодием. Средний возраст пациенток составил 32 года (от 23 до 43 лет). Исследование эмбрионов проводили с помощью FISH-метода.

Определение пола эмбриона проводили на ядрах бластомеров. Биопсия бластомера осуществлялась с помощью микроманипулятора. Для получения биологического материала прежде всего проводили пенетрацию наружной оболочки эмбриона (zona pellucida) до размера, достаточного для аспирации бластомера аспирационной микроиглой (20-40 мкм). Вскрытие zona pellucida осуществляли с помощью лазерного луча. Бластомер, содержащий четко видимое ядро, аспирировали в просвет микроиглы, соединенной с микрошприцем (50-100 мкл). Биопсированный бластомер помещали на предметное стекло, фиксировали и выполняли процесс гибридизации ДНК хромосом, содержащихся в ядре, и ДНК-зонда. Использовали зонды к X- и Y- хромосомам (фирма ABBOTT). Готовый препарат анализировали с помощью люминесцентного микроскопа (фирма Zeiss), при использовании которого каждая хромосома имеет свой, отличный от других, цвет свечения.

Результаты

Всего в 60 циклах стимуляции суперовуляции у 42 женщин было получено 520 ооцитов, после оплодотворения которых развился 371 эмбрион (71,3%). Биопсия бластомеров была проведена у 360 эмбрионов (11 эмбрионов были разрушены в ходе биопсии).

При исследовании 281 ядра, принадлежащего одноядерным бластомерам, нормальный набор по изучаемым хромосомам был определен в 217 из 281, что составило 77,2%, а в 64 отмечали различные типы анеуплоидии (22,8%). Женский набор хромосом был определен в 104 наблюдениях, мужской - в 113.

Среди выявленной патологии по изучаемым хромосомам наибольшая доля принадлежала моносомии X-хромосомы –29,7% (в 19 наблюдениях из 64). Моносомия Y-хромосомы была отмечена в 8 случаях (12,5%). Таким образом, общий уровень моносомии составил 42,2% (в 27 случаях из 64). Трисомия гоносом среди случаев выявленной анеуплоидии была отмечена в 28 наблюдениях, что составило 43,8%. Полисомия гоносом составила 12,5% (в 8 наблюдениях из 64).

После проведения процедуры забора бластомера дальнейшее развитие среди пригодных для биопсии эмбрионов наблюдали в 79% случаев. Из 60 случаев проведенной диагностики отмена переноса в связи с отсутствием нужного пола была в 10 случаях. Всего беременность наступила в 17 проведенных циклах, что составило 28% на цикл стимуляции и 34% на перенос эмбрионов. Из 13 клинических беременностей 4 остановились в развитии в 1-ом триместре беременности, 1 прервалась во 2-ом. 8 беременностей завершились родами, родилось 10 здоровых детей нужного пола (в 2-х случаях –двойни).

Выводы

Полученные нами данные показали, что проведение ПГД FISH-методом может успешно использоваться с целью определения пола эмбрионов и дальнейшего переноса в полость матки эмбриона желаемого пола. Кроме того, определение пола FISH-методом позволяет выявить патологию гоносом, что предотвращает перенос эмбриона с хромосомной патологией в полость матки пациентки, раннюю гибель эмбриона или рождение больного ребенка. Однако, учитывая наличие мозаицизма в эмбрионе, даже после проведения ПГД рекомендована пренатальная диагностика для исключения рождения ребенка с хромосомными нарушениями.


В наших клиниках ведут прием 52 специалиста
Среди них:
17
кандидатов
медицинских наук
7
врачей
высшей категории
4
врача
1-й категории
Врачи, выполняющие процедуру
Врач-генетик
Филиал Юго-Западный,
Филиал Хамовники
4 года опыта
Андреева Наталия Игоревна Врач-генетик
Врач-генетик
Филиал Юго-Западный,
Филиал Хамовники
11 лет опыта
Волкова Анастасия Владимировна Врач-генетик
prev
prev
Цены в Москве
Наименование
Цена (руб.)
 
Первичная консультация врача-генетика
3 800

Все статьи

Отзывы наших пациентов

Мы с благодарностью принимаем ваши тёплые слова!
Материнство — самая большая радость в жизни,
и мы разделяем её вместе с вами.

Хочу поблагодарить замечательных специалистов Татьяну Анатольевну Дьяченко, Елену Владимировну Минашкину, эмбриолога Сагунова за то, что помогли мне стать мамой. Татьяна Анатольевна явно фанат своего дела на связи всегда даже в дни, в которые я знаю, что у нее выходной. Весомым плюсом, облегчающим жизнь была коммуникация с менеджером по разным адми...
Хочу поблагодарить замечательных специалистов Татьяну Анатольевну Дьяченко, Елену Владимировну Минашкину, эмбриолога Сагунова за то, что помогли мне стать мамой. Татьяна Анатольевна явно фанат своего дела на связи всегда даже в дни, в которые я знаю, что у нее выходной. Весомым плюсом, облегчающим жизнь была коммуникация с менеджером по разным адми...
Анастасия Х.
02.12.2022
Зарина Мовлаевна стала моим лечащим врачом-репродуктологом в январе 2022г. – скоро будет год, как мы вместе работаем над тем, чтобы у меня появлился малыш. Была избрана тактика накопления эмбрионов с последующим криопереносом. На момент написания этого отзыва было проведено несколько пункций яйцеклеток, получено несколько жизнеспособных эмбрионов. ...
Зарина Мовлаевна стала моим лечащим врачом-репродуктологом в январе 2022г. – скоро будет год, как мы вместе работаем над тем, чтобы у меня появлился малыш. Была избрана тактика накопления эмбрионов с последующим криопереносом. На момент написания этого отзыва было проведено несколько пункций яйцеклеток, получено несколько жизнеспособных эмбрионов. ...
Юлия
24.11.2022
Хочу выразить огромную благодарность Ожогиной Екатерине Викторовне,благодаря её профессионализму, индивидуальному и чуткому подхожу мы стали родителями чудесной девочки! Обратилась в клинику на Лобачевского в ноябре 2020 с очень тяжелым анамнезом и низким резервом, бесплодием 3 года, после операции на яичниках, мне было 30 лет, наш путь был длинный...
Хочу выразить огромную благодарность Ожогиной Екатерине Викторовне,благодаря её профессионализму, индивидуальному и чуткому подхожу мы стали родителями чудесной девочки! Обратилась в клинику на Лобачевского в ноябре 2020 с очень тяжелым анамнезом и низким резервом, бесплодием 3 года, после операции на яичниках, мне было 30 лет, наш путь был длинный...
Татьяна
17.11.2022
Хочу выразить огромную благодарность Нова клиник и моему замечательному доктору Денису Васильевичу за нашу прекрасную доченьку!!! Это был мой пятый перенос и второй протокол, есть с чем сравнивать, это был самый мягкий протокол, я была спокойна и вообще не сомневалась в результате и все благодаря спокойной уверенности и поддержке Дениса Васильевича...
Хочу выразить огромную благодарность Нова клиник и моему замечательному доктору Денису Васильевичу за нашу прекрасную доченьку!!! Это был мой пятый перенос и второй протокол, есть с чем сравнивать, это был самый мягкий протокол, я была спокойна и вообще не сомневалась в результате и все благодаря спокойной уверенности и поддержке Дениса Васильевича...
Анна
16.11.2022
Благодаря Екатерине Валерьевне четыре года назад я стала мамой несмотря на диагноз бесплодие неясного генеза и 11 переносов без результата у предыдущих врачей. Обещала вернуться за вторым, думаю, что момент настал. Была рада встретить Екатерину Валерьевну вновь, соскучилась очень. Ваша пациентка, Юля
Благодаря Екатерине Валерьевне четыре года назад я стала мамой несмотря на диагноз бесплодие неясного генеза и 11 переносов без результата у предыдущих врачей. Обещала вернуться за вторым, думаю, что момент настал. Была рада встретить Екатерину Валерьевну вновь, соскучилась очень. Ваша пациентка, Юля
Юлия Р.
14.11.2022
Наша история длилась 6 лет! 6 Долгих лет слез, боли и отчаянья для молодой семейной пары, которая никак не могла забеременеть! Обойдя кучу врачей, таблеток, операций, обследований, узи, бесконечных анализов, вердикт - ЭКО. Цораеву Юлию Руслановну я нашла через социальные сети и отзывы девушек, уже ставшими мамочками у этого доктора. Приехали с муже...
Наша история длилась 6 лет! 6 Долгих лет слез, боли и отчаянья для молодой семейной пары, которая никак не могла забеременеть! Обойдя кучу врачей, таблеток, операций, обследований, узи, бесконечных анализов, вердикт - ЭКО. Цораеву Юлию Руслановну я нашла через социальные сети и отзывы девушек, уже ставшими мамочками у этого доктора. Приехали с муже...
Валерия
06.11.2022
Нова Клиник
Лобачевского д.20, Москва, Россия
+7 (495) 132-02-79, pochta@nova-clinic.ru